单细胞制备经验分享，让你的科研势不可挡！
甲状腺作为一种内分泌器官，能够产生、储存和释放甲状腺激素，调节身体新陈代谢、生长和发育。
甲状腺由多种细胞组成：滤泡上皮细胞或称甲状腺细胞，形成球形滤泡，参与摄入碘化物、合成和储存甲状腺激素；间充质细胞，隔开甲状腺滤泡；免疫细胞和神经细胞，参与免疫和神经反应；哺乳动物甲状腺还含有滤泡旁上皮细胞或C细胞，合成和分泌降钙素；这些细胞共同参与维持甲状腺的正常功能。
甲状腺功能异常将可能产生甲状腺功能障碍、甲状腺炎症和甲状腺瘤/癌等疾病。甲状腺功能障碍包括甲状腺功能减退症和甲状腺功能亢进症，严重时可导致精神障碍、发育迟缓和神经病变等。研究甲状腺组成和疾病机理将有助于改善相关患者的生存环境，而高通量单细胞测序对于解析甲状腺的异质性，认识不同类型细胞之间的联系，探究甲状腺疾病的复杂机理具有重要的作用，给甲状腺疾病临床诊治带来新的思考。
华大科技现可以实现甲状腺结节和甲状腺肿瘤的成功解离，科技君在这里跟大家毫无保留地分享我们的解离经验，也可以为您提供甲状腺解离服务，希望对您的研究进行助力。
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解离前相关物料准备
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解离步骤
1）配制酶溶液：将Collagenase Ⅱ溶于无FBS的培养基中，至终浓度为2mg/mL，置于37℃水浴锅中预热；
2）将干净组织块用手术刀剪碎至1-2mm3大小，转移至含有酶解液的15mL离心管中，37℃水浴锅中消化；
3）每30min用枪吹打数次，通过台盼蓝染色镜检观察组织消化状态，直至无明显组织块后停止消化；
4）使用40μm细胞筛过滤细胞悬液（细胞筛需用预冷PBS提前润洗），用预冷2~3mL完全培养基清洗残留细胞并过滤清洗液，收集滤液至15mL离心管中；
5）4℃离心，弃去上清；
6）加入2mL常温红细胞裂解液重悬沉淀，裂红2-5min，接着加入等量预冷PBS溶液终止裂红；
7）4℃离心，弃去上清（若沉淀仍有明显红色，则再重复步骤6）；
8）加入适量10% FBS培养基重悬沉淀，至细胞浓度为1×106左右；
9）根据细胞悬液体积加入适量PI染料（每100μL细胞中加入5μL PI），室温避光孵育5~10min；
10）用40μm细胞筛过滤细胞悬液，转移滤液至流式管中，用流式分选仪分选收集PI阴性细胞群；
11）4℃离心，弃去上清，加入10% FBS培养基清洗一次；
12）4℃离心，弃去上清；
13）加入适量10% FBS培养基重悬沉淀，移液枪轻轻吹打混匀后计数。
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解离结果
图1 计数示意图
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